酶发挥作用要求一定的条件，如温度、酸碱度以及某些激动剂和抑制剂等，对前的作用均有很大的影响。
1、温度对酶作用的影响：酶与一般的化学催化剂一样，随着温度的增高，催化反应的速度加快。但酶是蛋白质，温度增加到一定的高度，前就会变性而遭到破坏。加热到一定温度和时间，能消毒、灭菌，就是因为破坏了细菌体内的酶。所以前的作用要求适当的温度，这个温度既是酶催化反应速度最高、又恰是酶蛋白还没有变性的温度，这个温度称为酶的最适温度。人体内多数酶作用的最适温度，一般在37～40℃之间。在低温情况下，酶的活性降低，催化作用减弱，组织细胞的代谢过程和全部生理活动也必然随之降低，因而营养和能量的消耗也必然都减少。在这种状态下，可以较长时间地保存器官，组织的生活能力，不致死亡。根据这个道理，赤脚医生如果遇到不幸造成断肢事故的病人时，应尽快把离体断肢放在低温处（如4°C）暂时保存好，并努力争取时间，尽快把断肢与病人一起运到医院，以减少断肢组织细胞的分解代谢，有利于断肢再植的成活。
2、pH（酸碱度）对酶作用的影响：酶的催化作用的环境要求一定的酸碱度，过酸或过碱都会影响其活性。在某一酸碱度时，酶的活性最大，此酸碱度称为酶的最适pH值。如胃蛋白酶在酸性环境才能发挥最大作用，它的最适pH值为1.5。一般给胃蛋白酶助消化时，常与稀盐酸（10%）同服，就是根据这个道理。
3、激动剂与抑制剂对酶的影响：有些物质可以加速酶催化反应的进行，这类物质称为酶的激动剂。有些物质能减缓或完全停止酶催化反应的进行，这类物质称为酶的抑制剂。如红汞、界汞的杀菌消毒作用，是由于汞离子与细菌体内的酶结合，从而抑制了酶的活性，使细菌死亡。再如磺胺对某些细菌具有抑制其生长繁殖的作用，就是抑制了细菌体内合成其本身所需物质的酶，而发挥治疗作用的。可以说，磺胺药是某些细菌体内酶的抑制剂。
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